Certifikát analýzy (COA) u peptidů je protokol k jedné konkrétní šarži, který uvádí, jaké zkoušky laboratoř provedla a s jakým výsledkem. Klíčové jsou dva údaje: čistota stanovená metodou HPLC a identita potvrzená hmotnostní spektrometrií. COA má smysl jen tehdy, když číslo šarže na dokumentu odpovídá číslu šarže na lahvičce.
Certifikát analýzy je nejcennější dokument, který k výzkumnému peptidu dostanete, a zároveň jeden z nejčastěji špatně čtených. Údaj „čistota 99 %“ má různou váhu podle toho, jakou metodou vznikl a co tvoří zbývající procento. V článku projdeme jednotlivá pole COA, vysvětlíme metody, které za čísly stojí, a ukážeme, na co se ptát.
COA (z anglického Certificate of Analysis) je souhrnná zpráva vydaná pro jednu výrobní šarži. Zaznamenává provedené testy, jejich výsledky a specifikaci, se kterou byly porovnány. Protože se vztahuje ke konkrétní šarži, obecný certifikát bez čísla šarže nebo s číslem, které nesedí na lahvičku, nemá žádnou dohledatelnost. Takový dokument je spíš reklamní leták než analytický důkaz.
Poctivý COA syntetického peptidu obvykle obsahuje tyto údaje:
HPLC (vysokoúčinná kapalinová chromatografie) rozdělí vzorek na jednotlivé složky a detektor zaznamená každou z nich jako pík. Čistota se vyjadřuje jako podíl plochy píku hledaného peptidu na celkové ploše všech píků. Měří se při určité vlnové délce, nejčastěji 214 nm, kde absorbuje peptidová vazba, nebo 220 nm. Vlnová délka je důležitá: nečistoty, které při ní slabě absorbují, se ve výsledku projeví méně, než odpovídá skutečnosti.
Hmotnostní spektrometrie (MS) změří hmotnost molekuly a porovná ji s teoretickou hodnotou pro danou sekvenci. Potvrzuje tedy identitu: ve vzorku je skutečně deklarovaný peptid. Sama o sobě ale neříká, kolik je ve vzorku čehokoli jiného. Proto se obě metody kombinují.
Odborná literatura o charakterizaci peptidů se shoduje, že žádná jednotlivá metoda nestanoví identitu i čistotu najednou. Spolehlivý obraz dávají až nezávislé, takzvané ortogonální metody, typicky HPLC spolu s MS.
Tohle rozlišení působí víc zmatku než cokoli jiného na certifikátu. Chromatografická čistota říká, jaký podíl detekovaného materiálu tvoří hledaný peptid. Obsah peptidu říká, jaký podíl celkové suché hmotnosti v lahvičce je vůbec peptid.
Lyofilizovaný peptid totiž není stoprocentní peptid podle hmotnosti. Prášek obsahuje i vodu nasátou při manipulaci, zbytkové soli a protiionty z purifikace, nejčastěji trifluoroacetát, někdy vyměněný za acetát. Šarže tak může mít zcela správně uvedenou čistotu 99 % z HPLC, a přitom peptid tvoří menší část navážky. Oba údaje jsou legitimní, jen odpovídají na jinou otázku.
Mnohé z těchto nečistot mají hmotnost blízkou cílovému peptidu, a proto je důležité vidět skutečný chromatogram a spektrum, ne jen souhrnnou tabulku.
Na třech často zkoumaných peptidech je dobře vidět, proč se COA vyplatí číst pozorně:
Výzkumné peptidy jsou v EU laboratorní chemikálie, ne léčivé přípravky. COA dokumentuje analytické vlastnosti šarže činidla. Není to registrace léčiva, není to doklad bezpečnosti a neříká nic o vhodnosti pro podání živému organismu. Čistota a bezpečnost jsou dva různé pojmy a jejich zaměňování je při čtení certifikátů nejčastější chyba.
Naše peptidy ověřuje nezávislá laboratoř: čistotu metodou HPLC, identitu hmotnostní spektrometrií. Deklarujeme čistotu ≥99 % a certifikát analýzy je k dispozici ke každé šarži. Zásilky odesíláme diskrétně a se sledováním v rámci EU, zaplatit můžete kartou, přes Google Pay nebo kryptoměnou.
Certifikát si zakládejte k číslu šarže spolu s datem příjmu a datem rekonstituce. Bez toho nelze ani po měsících výsledek pokusu spolehlivě přiřadit k materiálu. Jak se suchý prášek a roztok mění v čase, popisuje článek Skladování peptidů v laboratoři, volbě rozpouštědla se věnuje článek Kyselina octová 0,6 % nebo bakteriostatická voda.
Že pík hledaného peptidu tvořil v chromatogramu HPLC 99 % celkové plochy píků při uvedené vlnové délce. Neznamená to, že 99 % hmotnosti v lahvičce je peptid, protože vodu, soli a protiionty tato metoda nezachytí.
Čistota z HPLC je podíl hledané sekvence na detekovaném materiálu. Obsah peptidu je podíl peptidu na celkové suché hmotnosti. Stanovují se jinými metodami a odpovídají na jiné otázky.
HPLC ukáže, kolik je ve vzorku hledané látky vůči nečistotám, MS potvrdí, že jde o správnou molekulu. Teprve společně dávají obraz o čistotě i identitě.
Certifikát bez čísla šarže nelze spojit s materiálem, který držíte v ruce. Bez chromatogramu a spektra zase nemůžete sami posoudit tvar píků ani integraci. Nemusí jít o důkaz problému, ale z dokumentu se tím stává pouhé tvrzení.
Ne. Certifikát analýzy je analytický dokument k šarži a nemá žádnou regulační váhu.
Pouze pro výzkumné účely. Není určeno k lidské ani zvířecí spotřebě.
Kyselina octová 0,6 % pomáhá rozpustit peptidy, které se v neutrální vodě rozpouštějí špatně, bakteriostatická voda je univerzální volba pro peptidy dobře rozpustné ve vodě. Článek obě rozpouštědla srovnává.
Číst článek
Bakteriostatická voda je sterilní voda s 0,9 % benzylalkoholu, která slouží k rekonstituci lyofilizovaných peptidů. Článek vysvětluje, čím se liší od sterilní vody, jak s ní pracovat a jak ji skladovat.
Číst článek
MOTS-c je peptid ze 16 aminokyselin zapsaný v mitochondriální DNA a zkoumá se jako metabolický signál. SS-31 (elamipretid) je syntetický tetrapeptid, který se váže na kardiolipin ve vnitřní mitochondriální membráně. Článek srovnává jejich původ, chemii, výzkum a laboratorní manipulaci.
Číst článek