Opbevaring af peptider er den mindst spændende del af et forsøg, men også en af de hyppigste grunde til, at resultater ikke kan gentages. Et hætteglas, der har ligget varmt, været frosset og tøet op flere gange eller stået i lys i månedsvis, er ikke længere kemisk det samme som det, analysecertifikatet beskriver.
Kort svar: Lyofiliserede peptider opbevares forseglet, tørt og beskyttet mod lys ved 2-8 °C, og ved -20 °C eller koldere, hvis de skal holde længe. Opløste peptider er langt mindre stabile, skal stå på køl og bør portioneres, så du undgår gentagen frysning og optøning. Opbevaringsangivelsen i analysecertifikatet (COA) for dit batch er altid den, der gælder.
Hvad betyder stabilitet for et peptid?
Stabilitet er ikke én egenskab, men to, som måles hver for sig.
- Kemisk stabilitet: er peptidets struktur intakt, eller er aminosyresekvensen ændret ved hydrolyse, oxidation, deamidering eller ombytning af disulfidbroer?
- Fysisk stabilitet: findes molekylet stadig i den tilsigtede form, eller er det klumpet sammen, sat sig på glasvæggen, udfældet, eller er den frysetørrede kage faldet sammen?
De to kan godt gå hver sin vej. Et peptid kan bestå en identitetstest med massespektrometri, selv om en stor del af det er klumpet sammen og ikke længere er i opløsning. Derfor kombinerer stabilitetsstudier typisk HPLC for renhed med en størrelsesbaseret metode.
Ved hvilken temperatur skal peptider opbevares?
Den tørre, lyofiliserede form er langt mere robust end en opløsning. I litteraturen opbevares tørre peptider typisk på køl ved 2-8 °C til almindelig brug og frosset ved -20 °C eller koldere, når de skal holde længere. Nedbrydning går hurtigere, jo varmere det er, og det er netop derfor, holdbarhedstest udføres ved forhøjet temperatur.
Hos PureChems står opbevaringsangivelsen på hvert produkt. BPC-157 10 mg, TB-500 10 mg og GHK-Cu 100 mg skal alle opbevares ved 2-8 °C og beskyttes mod lys.
Er en almindelig fryser god nok?
En fryser med automatisk afrimning er ikke det samme som en fryser, du afrimer manuelt. Den automatiske afrimning hæver bevidst temperaturen i korte perioder, og det kan belaste peptider ved lang tids opbevaring. Notér derfor også, hvis der har været temperaturudsving.
Hvorfor skal peptider beskyttes mod lys?
Lys kan nedbryde peptider, også i tør form. Forsøg med frysetørrede formuleringer har vist, at nedbrydning fra lys kunne måles med HPLC, når hætteglasset kun stod i sin primære emballage, og at den forsvandt, når der kom en ydre æske udenom. Opbevar derfor hætteglassene i deres æske eller i en uigennemsigtig beholder.
Fugt: hvorfor du skal vente, før du åbner hætteglasset
Hydrolyse og deamidering kræver vand, og restfugt i et frysetørret pulver er derfor noget, producenter måler, før et batch frigives. Lyofiliserede pulvere trækker fugt til sig.
Tager du et koldt hætteglas ud af køleskabet eller fryseren og åbner det med det samme, trækker det fugtig luft ind, og der dannes kondens på pulveret. Lad derfor altid hætteglasset nå stuetemperatur, før du åbner det. Hold forseglingen intakt, til du skal bruge peptidet, for gummiproppen er den vigtigste barriere mod fugt og ilt.
Hvor lang holdbarhed har peptider?
Der er ikke ét svar, for det afhænger af sekvensen, formuleringen og opbevaringen. Nogle peptider er mere sårbare end andre:
- Methionin, cystein og tryptofan oxiderer let.
- Asparagin efterfulgt af glycin er et klassisk sted for deamidering.
- pH og buffer påvirker stabiliteten af et opløst peptid markant.
Den relevante reference er opbevaringsbetingelsen og en eventuel retestdato på analysecertifikatet for netop dit batch, ikke et generelt tal fra internettet.
Opbevaring af peptider efter rekonstituering
Når et peptid er opløst, falder holdbarheden markant, fordi vand indgår direkte i de vigtigste nedbrydningsprocesser. Opløste peptider kan også klumpe sammen og sætte sig på beholderens vægge. Behandl derfor en opløsning som en arbejdsopløsning med kort levetid:
- Opbevar opløsningen på køl og beskyttet mod lys.
- Fordel den i enkeltportioner i stedet for at åbne det samme hætteglas igen og igen.
- Undgå gentagen frysning og optøning. Når der dannes is, opstår der grænseflader, som fremmer sammenklumpning.
- Notér opløsningsmiddel, koncentration, dato for rekonstituering og opbevaringstemperatur.
Valget af opløsningsmiddel spiller også ind, fordi pH og konserveringsmiddel er forskellige. Det gennemgår vi i guiden til rekonstituering af peptider.
Opbevaring af BPC-157, TB-500 og GHK-Cu
De tre peptider leveres alle som lyofiliseret pulver og skal opbevares ved 2-8 °C, beskyttet mod lys. GHK-Cu kræver lidt ekstra opmærksomhed: det er et kobberkompleks, og kobberkomplekser kan være følsomme over for pH og oxidation. En opløsning af GHK-Cu har en karakteristisk blå farve. Læs mere om kobberpeptidet i artiklen om GHK-Cu, og om TB-500 i TB-500 Danmark.
Tjekliste: når pakken med peptider ankommer
- Kontrollér, at forseglingen på hvert hætteglas er intakt.
- Sammenlign batchnummeret på hætteglasset med analysecertifikatet.
- Sæt hætteglassene på køl ved 2-8 °C i deres æske, eller i fryseren ved -20 °C, hvis de skal holde længe.
- Notér modtagelsesdato og opbevaringssted.
- Lad være med at åbne hætteglassene, før du skal bruge dem.
Sådan dokumenterer du opbevaringen
- Notér, i hvilken stand forsendelsen ankom.
- Gem analysecertifikatet sammen med batchnummeret, så renheden altid kan læses sammen med opbevaringshistorikken.
- Notér temperaturudsving i køleskab og fryser.
- Skriv dato for modtagelse og dato for rekonstituering på.
Uden de oplysninger kan et uventet resultat ikke føres tilbage til materialet med sikkerhed. Hvordan du læser renheden på certifikatet, kan du se i artiklen om HPLC og massespektrometri.
Ofte stillede spørgsmål om opbevaring af peptider
Skal peptider opbevares i køleskab?
Ja, til almindelig opbevaring ved 2-8 °C og beskyttet mod lys. Til længere tids opbevaring fryses det tørre pulver typisk ved -20 °C eller koldere.
Hvorfor er peptider mindre stabile i opløsning?
Fordi vand indgår direkte i nedbrydningen. Hydrolyse og deamidering kræver vand, og opløste molekyler kan desuden klumpe sammen og sætte sig på glasset.
Skader frysning og optøning peptider?
Ja, gentagne cyklusser kan fremme sammenklumpning. Fordel derfor opløsningen i enkeltportioner.
Hvor længe kan et lyofiliseret peptid holde?
Det afhænger af peptidet og opbevaringen. Følg opbevaringsangivelsen og en eventuel retestdato på analysecertifikatet for dit batch.
Hvorfor skal hætteglassene stå i æsken?
Fordi lys kan nedbryde peptider, også i tør form. En uigennemsigtig ydre emballage beskytter mod det.
Hvad er en retestdato?
Den dato, hvor et batch bør analyseres igen, før det bruges. Står der en retestdato på analysecertifikatet, er det den, du skal forholde dig til.
Hvordan opbevares bakteriostatisk vand?
Ved stuetemperatur, 15-25 °C, og beskyttet mod forurening.
Kun til forskningsbrug. Ikke til indtagelse af mennesker eller dyr.