Rekonstituering af peptider er det første praktiske skridt, når et frysetørret forskningspeptid ankommer til laboratoriet. Pulveret skal opløses, før det kan portioneres, analyseres eller bruges i et forsøg, og måden, du gør det på, påvirker både hvor godt peptidet opløses, og hvor stabilt det forbliver i hætteglasset.
Kort svar: Rekonstituering betyder, at du tilsætter en afmålt mængde opløsningsmiddel til et lyofiliseret peptid, så det bliver til en opløsning med en kendt koncentration. Du lader hætteglasset nå stuetemperatur, tilsætter opløsningsmidlet langsomt langs glassets inderside og svinger forsigtigt i stedet for at ryste. Opløsningsmidlet vælges efter peptidets dokumentation, typisk bakteriostatisk vand eller fortyndet eddikesyre.
De fleste forskningspeptider leveres lyofiliserede, det vil sige frysetørrede. Når vandet er fjernet, er peptidet langt mere holdbart, men det kan ikke bruges i den form. Rekonstituering er processen, hvor pulveret bliver til en væske igen ved en kendt koncentration.
Pulveret er ofte kun en tynd, næsten usynlig hinde i bunden af glasset. Det betyder ikke, at hætteglasset er tomt. Mængden står på etiketten og i analysecertifikatet (COA).
To ting er afgørende ved rekonstituering: opløselighed, altså om peptidet opløses helt, og stabilitet, altså om det forbliver intakt i opløsningen. Forskellige peptider opfører sig forskelligt, og derfor findes der mere end ét opløsningsmiddel på laboratoriebordet.
Det mest pålidelige svar står i dokumentationen for det konkrete peptid. Analysecertifikatet eller produktbeskrivelsen kan anbefale vand, bakteriostatisk vand eller en fortyndet syre som eddikesyre.
Bakteriostatisk vand er sterilt vand tilsat 0,9 % benzylalkohol som konserveringsmiddel. Benzylalkoholen hæmmer bakterievækst, når det samme hætteglas åbnes flere gange. Det er næsten pH-neutralt, passer til mange peptider og er det naturlige førstevalg til peptider, der i forvejen er letopløselige i vand. Almindeligt sterilt vand giver ikke den samme beskyttelse ved gentagen brug.
Eddikesyre 0,6 % giver et let surt miljø. Nogle peptider, især dem der klumper sammen eller er tungtopløselige ved neutral pH, opløses lettere under let sure forhold. Eddikesyre bruges derfor oftest som opløsningshjælp og ikke som standardvalg.
| Bakteriostatisk vand | Eddikesyre 0,6 % | |
|---|---|---|
| Sammensætning | Sterilt vand med 0,9 % benzylalkohol | Fortyndet eddikesyre |
| pH | Næsten neutral | Let sur |
| Typisk til | Letopløselige peptider, hætteglas der åbnes flere gange | Tungtopløselige peptider, der klumper |
| Opbevaring af flasken | Stuetemperatur, 15-25 °C | Stuetemperatur, 15-25 °C |
Fremgangsmåden nedenfor er almindelig laboratoriepraksis for lyofiliserede forskningspeptider. Følg altid dit laboratoriums egne procedurer og dokumentationen for batchet.
Koncentrationen er mængden af peptid divideret med mængden af opløsningsmiddel. Med 10 mg peptid i hætteglasset ser det sådan ud:
| Peptid | Opløsningsmiddel | Koncentration |
|---|---|---|
| 10 mg | 1 ml | 10 mg/ml |
| 10 mg | 2 ml | 5 mg/ml |
| 10 mg | 5 ml | 2 mg/ml |
Vælg den koncentration, dit forsøg kræver, og notér den på hætteglasset.
BPC-157 10 mg leveres som lyofiliseret pulver i et hætteglas på 10 ml af glas, så der er god plads til opløsningsmidlet. Opløsningsmidlet vælger du ud fra dokumentationen for batchet, og volumenet ud fra den koncentration, dit forsøg kræver. Herefter følger du trinene ovenfor. Det tørre pulver opbevares ved 2-8 °C og beskyttet mod lys, indtil du skal bruge det.
Der findes ikke ét tal, der gælder for alle peptider. Holdbarheden afhænger af sekvensen, opløsningsmidlet og temperaturen. Det, der gælder generelt, er, at et peptid i opløsning er markant mindre stabilt end det tørre pulver, fordi vand indgår direkte i de vigtigste nedbrydningsprocesser som hydrolyse og deamidering.
Derfor rekonstituerer mange laboratorier i små portioner og holder opløsningen kold. Gentagen frysning og optøning belaster peptidet, så det er bedre at fordele opløsningen i enkeltportioner end at tø hele beholdningen op igen og igen. Læs mere i vores guide til opbevaring af peptider.
Er du i tvivl om, hvad tallene i dokumentationen betyder, kan du læse om HPLC og renhed af peptider.
Det afhænger af peptidet. Letopløselige peptider opløses ofte i bakteriostatisk vand, mens tungtopløselige peptider kan opløses mere fuldstændigt i fortyndet eddikesyre. Det er peptidets egen opløselighed, der afgør valget.
Nej. Sving forsigtigt, og lad pulveret opløses af sig selv. Kraftig omrystning kan skade peptidet.
Et par milligram frysetørret peptid fylder meget lidt og ligger ofte som en tynd hinde i bunden. Mængden fremgår af etiketten og analysecertifikatet.
Fortyndet eddikesyre giver et let surt miljø, som mange peptider tåler godt. Kompatibiliteten varierer dog fra sekvens til sekvens, så følg dokumentationen for dit peptid.
Nej. Begge sælges hos os som laboratoriereagenser til forskning.
Kun til forskningsbrug. Ikke til indtagelse af mennesker eller dyr.
Semax er et syntetisk heptapeptid afledt af ACTH 4-10, som bruges i neurovidenskabelig forskning i BDNF og neurobeskyttelse. Artiklen forklarer, hvad Semax er, hvordan det adskiller sig fra Selank, og hvad du skal kigge efter, når du bestiller det til laboratoriet.
Læs artiklen
TB-500 er et syntetisk peptid baseret på en aktiv del af thymosin beta-4, og analysecertifikatet er den eneste måde at se, hvad der faktisk er i hætteglasset. Artiklen viser, hvad et COA for TB-500 skal indeholde, og hvordan du læser det.
Læs artiklen
Hos PureChems bestiller du forskningspeptider fra en leverandør i EU med sporet og diskret forsendelse og betaling med kort, Google Pay eller krypto. Artiklen viser trin for trin, hvordan en bestilling foregår, og hvad du skal tjekke hos enhver EU-leverandør.
Læs artiklen