O certificado de análise de péptidos, conhecido por COA, é o relatório laboratorial de um lote concreto: diz que molécula está no frasco, com que pureza e por que método foi medida. Ler um COA resume-se a confirmar que o número de lote coincide com o do frasco, que a pureza vem de HPLC, que a massa medida por espectrometria de massa bate com a massa teórica e que o documento tem data.
Um "99% de pureza" impresso numa folha pode valer muito ou quase nada, consoante o método, o lote e aquilo que não aparece na tabela. Este guia percorre o documento campo a campo e termina com as perguntas que um laboratório exigente faz antes de usar um material.
É o resumo dos testes feitos a um lote específico de um material: para cada teste, o método, o resultado e a especificação com que foi comparado.
A palavra decisiva é lote. Um COA só tem valor quando o número de lote impresso no documento é o mesmo que está no rótulo do frasco. Um certificado genérico, sem número de lote, ou com um lote que não corresponde ao material recebido, não permite rastrear nada. Nesse caso é um documento de marketing, não uma prova analítica.
Um COA razoavelmente completo para um péptido sintético inclui, em regra, os seguintes campos:
Significa que, no cromatograma de HPLC, o pico do péptido-alvo representa pelo menos 99% da área total integrada, a um determinado comprimento de onda. É uma medida relativa: compara o péptido certo com as outras espécies peptídicas que o método deteta.
O comprimento de onda conta. A deteção faz-se quase sempre a 214 nm, onde absorve a ligação peptídica, ou a 220 nm. As impurezas que absorvem pouco nesse comprimento de onda ficam sub-representadas na integração. Por isso, um COA sério indica o comprimento de onda junto do valor de pureza.
Não, e esta é a confusão mais comum. A pureza cromatográfica diz que fração do material peptídico detetado é o péptido-alvo. O teor de péptido diz que fração da massa seca total do frasco é, de facto, péptido.
Um péptido liofilizado raramente é só péptido. O pó contém água absorvida durante o manuseamento, sais residuais e contraiões do passo de purificação. O ácido trifluoroacético é o aditivo habitual na purificação preparativa em fase reversa e fica associado aos resíduos básicos do péptido final. Consoante a sequência, a água, os sais e o contraião podem representar uma parte importante da massa.
Um material pode, portanto, ter 99% de pureza por HPLC e, ainda assim, o péptido ser uma fração menor daquilo que a balança pesa. Os dois números são legítimos, apenas respondem a perguntas diferentes. Um COA que só mostra o primeiro conta uma história incompleta.
Pela espectrometria de massa. O laboratório mede a massa da molécula e compara-a com a massa teórica calculada a partir da fórmula. Se coincidem, a molécula certa está presente.
Um exemplo concreto: o BPC-157 10 mg tem a fórmula C62H98N16O22 e uma massa molecular de 1419,535 g/mol; o TB-500 tem a fórmula C212H350N56O78S e cerca de 3350,96 g/mol. São estes os valores que a massa observada no COA deve confirmar.
A espectrometria de massa confirma a identidade, mas não quantifica o resto do conteúdo. Por isso a HPLC e a espectrometria de massa trabalham em conjunto: uma diz quanto do material peptídico é a sequência certa, a outra confirma que a sequência é mesmo aquela. Nenhum método isolado estabelece as duas coisas.
Os pontos percentuais que faltam num cromatograma não são aleatórios. As impurezas típicas dos péptidos sintéticos são:
O contraião, normalmente trifluoroacetato e por vezes trocado por acetato, é reportado à parte da pureza. O teor de água mede-se por titulação de Karl Fischer e muda com o manuseamento, porque o pó liofilizado é higroscópico.
Uma resposta negativa não prova que haja um problema. Mas reduz o documento a uma afirmação, em vez de uma prova que se possa verificar.
Um certificado de análise descreve as propriedades analíticas de um lote de reagente e nada mais. Não é uma autorização de introdução no mercado, não prova segurança e não diz nada sobre a adequação a qualquer ser vivo. Um material pode ter um COA impecável, com pureza elevada e massa correta, e continuar a ser estritamente um reagente de laboratório. Pureza e segurança são conceitos diferentes, e confundi-los é o erro mais frequente na leitura destes documentos.
Na PureChems, cada lote é verificado por HPLC e por espectrometria de massa num laboratório independente, com pureza igual ou superior a 99%, e tem o seu próprio certificado de análise. A ficha de cada produto indica a fórmula molecular, a massa molecular e um número de teste: no BPC-157, por exemplo, é o BPC-2501-A.
As encomendas seguem de forma discreta e com seguimento a partir da União Europeia, com pagamento por cartão, Google Pay ou criptomoedas. Para comparar dois dos péptidos mais estudados, há o artigo BPC-157 vs TB-500.
O COA só é útil meses depois se continuar ligado ao material. A prática de laboratório é arquivá-lo com o número de lote, a data de receção e a data de reconstituição. Sem esse registo, um resultado experimental estranho não pode ser atribuído ao material com confiança.
A conservação também mexe com os números, sobretudo com o teor de água. Os pormenores estão no guia como armazenar péptidos, e a escolha do solvente em comprar água bacteriostática. Para aprofundar a parte analítica, há o artigo sobre pureza, HPLC e espectrometria de massa.
Que o pico do péptido-alvo representa 99% da área integrada no cromatograma de HPLC, ao comprimento de onda indicado. Não quer dizer que 99% da massa do frasco seja péptido, porque a água, os sais e os contraiões não são detetados por este método.
A pureza por HPLC é a proporção do material peptídico detetado que corresponde à sequência certa. O teor de péptido é a proporção da massa seca total que é péptido. São medidos por métodos diferentes, e um COA completo apresenta os dois.
Não permite ligar o documento ao frasco recebido, por isso não oferece rastreabilidade. Um COA só com a tabela-resumo, sem cromatograma nem espectro de massa, também impede uma avaliação independente dos dados.
Não. É um documento analítico de lote, sem qualquer valor regulamentar. Os péptidos de investigação não foram avaliados pela Agência Europeia de Medicamentos nem pelas autoridades nacionais para uso humano ou veterinário.
Apenas para fins de investigação. Não destinado a consumo humano ou animal.
A água bacteriostática é água estéril com 0,9% de álcool benzílico, o solvente mais usado para reconstituir péptidos liofilizados. Este guia explica o que verificar antes de comprar, quando escolher ácido acético e como conservar.
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O B7-33 é um péptido de cadeia única derivado da relaxina-2, desenhado como análogo funcional simplificado da hormona. A investigação, ainda pré-clínica, estuda a sua sinalização no recetor RXFP1 e em modelos de fibrose.
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O MK-677 (ibutamoren) é uma pequena molécula não peptídica estudada como agonista do recetor da grelina. Antes de comprar MK-677 para investigação convém confirmar o formato, o COA do lote e a pureza; a PureChems fornece cápsulas de 25 mg, 60 por frasco.
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