Як розрахувати концентрацію пептиду: розведення розчину

Коротка відповідь. Як розрахувати концентрацію пептиду: поділіть масу пептиду у флаконі на об'єм доданого розчинника, C = m / V. Наприклад, 10 мг пептиду у 2 мл розчинника дають 5 мг/мл, тобто 5000 мкг/мл. Точність результату залежить від того, наскільки точно відміряно об'єм, тому розчинник відмірюють, а не доливають на око.

Арифметика проста, але саме на ній часто помиляються: плутають міліграми з мікрограмами, мілілітри з мікролітрами або забувають, що номінальна маса пептиду не завжди дорівнює реальній. Нижче формули, приклади і перелік типових помилок. Йдеться про лабораторні розрахунки для приготування розчинів і аналітичних проб.

Що таке концентрація розчину пептиду?

Концентрація показує, скільки речовини міститься в одиниці об'єму розчину. Для пептидів її зазвичай записують у міліграмах на мілілітр (мг/мл) або мікрограмах на мілілітр (мкг/мл).

Два перетворення, які варто пам'ятати:

• 1 мг = 1000 мкг;
• 1 мл = 1000 мкл.

Звідси корисний факт: 1 мг/мл дорівнює 1 мкг/мкл. Це спрощує розрахунки, коли працюєте з мікропіпетками.

Як розрахувати концентрацію пептиду: формула

Базова формула одна:

C = m / V, де C це концентрація, m маса пептиду, V об'єм розчинника.

Візьмемо флакон BPC-157 по 10 мг. Якщо додати до нього 2 мл бактеріостатичної води, концентрація становитиме 10 мг / 2 мл = 5 мг/мл. Те саме справедливо для Ipamorelin 10 мг або будь-якого іншого флакона з тією самою масою.

Таблиця для флакона 10 мг

Що більше розчинника, то нижча концентрація. Зручні «круглі» значення спрощують подальші розрахунки і зменшують ризик помилки.

Як знайти об'єм, що містить потрібну масу?

Якщо концентрація відома, об'єм для потрібної маси пептиду (наприклад, для аналітичної проби чи робочого розчину) рахують за перетвореною формулою:

V = m / C

Приклад: розчин має 5 мг/мл, тобто 5 мкг/мкл. Щоб відібрати 100 мкг пептиду, потрібно 100 / 5 = 20 мкл розчину.

Як приготувати робочий розчин нижчої концентрації?

Часто з концентрованого вихідного розчину готують робочий розчин нижчої концентрації. Для цього використовують формулу розведення:

C1 × V1 = C2 × V2

Тут C1 і V1 це концентрація і об'єм вихідного розчину, який ви берете, а C2 і V2 концентрація і об'єм розчину, який хочете отримати.

Приклад: є вихідний розчин 5 мг/мл, потрібно 1 мл розчину 0,5 мг/мл. V1 = (0,5 × 1) / 5 = 0,1 мл. Отже, беремо 0,1 мл вихідного розчину і додаємо 0,9 мл розчинника, щоб разом вийшов 1 мл.

Ступінь розведення тут 1 до 10. Для великих розведень зручніше робити кілька послідовних кроків, ніж відміряти дуже малий об'єм за один раз.

Покроковий приклад: від флакона до робочого розчину

1. Визначте масу. На етикетці флакона 10 мг пептиду.
2. Оберіть цільову концентрацію вихідного розчину. Наприклад, 2 мг/мл, бо з нею легко рахувати.
3. Порахуйте об'єм розчинника. V = m / C = 10 / 2 = 5 мл.
4. Додайте розчинник. Відміряйте 5 мл і повільно введіть по стінці флакона, потім обережно покрутіть флакон, не струшуючи.
5. Приготуйте робочий розчин. Потрібно 2 мл розчину 0,2 мг/мл: V1 = (0,2 × 2) / 2 = 0,2 мл вихідного розчину і 1,8 мл розчинника.
6. Підпишіть обидва флакони. Речовина, концентрація, розчинник, дата, номер партії.

Перевірка: у 2 мл робочого розчину має бути 0,4 мг пептиду. Стільки ж ви взяли з вихідного розчину (0,2 мл × 2 мг/мл = 0,4 мг). Цифри сходяться, отже, розрахунок правильний. Таку зворотну перевірку корисно робити щоразу.

Номінальна маса і реальний вміст пептиду

Розрахунок за формулою C = m / V дає номінальну концентрацію, бо за m беруть масу, вказану на етикетці. Але ліофілізований порошок, крім пептиду, містить воду, солі і протиіони, які залишаються після очищення. Тому реальна частка пептиду в масі може бути меншою за 100%.

Якщо для вашої роботи важлива точна кількість саме пептиду, дивіться в сертифікаті аналізу, чи вказано вміст пептиду окремо від чистоти за HPLC. Чим ці цифри відрізняються, пояснюємо в статті Сертифікат аналізу пептиду: як читати COA і HPLC.

Як обрати об'єм розчинника?

• Зручність розрахунків. Обирайте об'єм, що дає кругле значення концентрації, як-от 1, 2 або 5 мг/мл.
• Розчинність. Занадто малий об'єм може не розчинити пептид повністю. Якщо розчин каламутний, можливо, потрібен інший розчинник.
• Місткість флакона. Наприклад, BPC-157 від PureChems постачається у скляному флаконі на 10 мл, тож запас місця є.
• Стабільність. Розчин зберігається гірше за порошок, тому розводьте лише ту кількість, яку використаєте в робочий період.

Який розчинник обрати, розповідаємо в статті Бактеріостатична вода чи оцтова кислота: чим розводити пептиди.

Типові помилки в розрахунках

1. Плутанина мг і мкг. Помилка в 1000 разів, яку легко зробити і важко помітити.
2. Плутанина мл і мкл. Та сама проблема з об'ємом.
3. Об'єм «на око». Кінцеву концентрацію задає виміряний об'єм, тому використовуйте точний мірний інструмент.
4. Неврахування об'єму вихідного розчину. У формулі розведення V2 це загальний кінцевий об'єм, а не об'єм доданого розчинника.
5. Відсутність підпису. Без етикетки з концентрацією через тиждень уже ніхто не згадає, що у флаконі.

Що написати на етикетці?

На флаконі з розчином мають бути назва речовини, концентрація, розчинник і дата розведення. Додайте номер партії, щоб завжди можна було звірити розчин із сертифікатом аналізу. Розчин зберігайте в холодильнику і діліть на аліквоти. Детальніше в гіді Як зберігати пептиди.

Що ви отримуєте в PureChems

Пептиди мають чистоту від 99%, яку незалежна лабораторія підтверджує методами HPLC і мас-спектрометрії, і сертифікат аналізу до кожної партії. Бактеріостатична вода постачається у флаконах по 10 мл. Відправляємо з країни ЄС у непомітній упаковці, з номером для відстеження. Оплатити можна карткою, через Google Pay або криптовалютою.

Часті запитання

Як розрахувати концентрацію пептиду у флаконі?

Поділіть масу пептиду на об'єм розчинника. 10 мг у 2 мл дають 5 мг/мл.

Скільки мікрограмів в одному міліграмі?

1000. Отже, 5 мг/мл це 5000 мкг/мл, або 5 мкг/мкл.

Як розвести розчин до нижчої концентрації?

Скористайтеся формулою C1 × V1 = C2 × V2. Наприклад, 0,1 мл розчину 5 мг/мл, доведені розчинником до 1 мл, дають 0,5 мг/мл.

Чому реальна концентрація може бути нижчою за розрахункову?

Тому що порошок містить не лише пептид, а й воду, солі і протиіони. Точний вміст пептиду дивіться в сертифікаті аналізу.

Чи впливає вибір розчинника на розрахунок?

На саму формулу ні, але розчинник впливає на розчинність і стабільність. Якщо пептид не розчинився повністю, фактична концентрація буде нижчою.

Лише для наукових досліджень. Не для споживання людиною чи твариною.