Коротка відповідь. Як зберігати пептиди: ліофілізований порошок тримають запаяним, у холоді від 2 до 8 °C для звичайного зберігання або в морозильній камері при мінус 20 °C і нижче для тривалого, завжди захищеним від світла і вологи. Розведений пептид зберігають лише в холодильнику, як короткочасний робочий запас, поділений на аліквоти. Головні вороги стабільності: тепло, волога, світло і повторне заморожування та розморожування.
Зберігання здається найнуднішою частиною роботи з пептидами, але саме через нього результати часто не відтворюються. Флакон, що побував у теплому транспорті, у морозилці з агресивним циклом розморожування або пів року на столі під лампою, вже хімічно не той, що описаний у сертифікаті аналізу. Нижче пояснюємо, що руйнує пептиди і як цього уникнути.
Що таке стабільність пептиду?
Стабільність складається з двох окремих питань. Хімічна стабільність означає, що ковалентна структура ціла, тобто послідовність амінокислот не змінилась через гідроліз, окиснення, дезамідування чи перестановку дисульфідних зв'язків. Фізична стабільність означає, що молекула перебуває в потрібному стані: не злиплася в агрегати, не прилипла до стінок флакона, не випала в осад.
Ці дві речі можуть розходитися. Препарат може пройти перевірку ідентичності мас-спектрометрією, хоча значна частина молекул уже агрегувала і в розчині недоступна. Тому в дослідженнях стабільності поєднують HPLC для чистоти з методами, що оцінюють розмір частинок.
Чому сухий пептид стабільніший за розчин?
Вода бере пряму участь у головних хімічних реакціях руйнування. Гідроліз пептидного ланцюга і дезамідування залишків аспарагіну та глутаміну без води не відбуваються. Крім того, молекули в розчині вільно рухаються, злипаються і осідають на поверхнях.
Ліофілізація, тобто висушування заморожуванням, прибирає воду і цим дає довгий термін зберігання. В опублікованих програмах стабільності ліофілізованих пептидних і білкових препаратів повідомляли про збереження цілісності від 12 до 24 місяців у холоді від 2 до 8 °C і про коротші терміни при кімнатній температурі. Для конкретної партії орієнтиром є умови і дата повторного контролю в її сертифікаті аналізу, а не загальна цифра.
Що руйнує пептиди?
- Температура. Швидкість руйнування різко зростає з нагріванням. Саме на цьому побудовані прискорені тести стабільності.
- Волога. Залишкову вологу в ліофілізованому порошку контролюють окремо, бо вона запускає гідроліз і дезамідування.
- Світло. Фотодеградацію сухих пептидних препаратів описано в літературі. В одній програмі стабільності ліофілізований білковий препарат руйнувався на світлі в первинній упаковці, а зовнішня картонна коробка це повністю зупиняла.
- Склад послідовності. Метіонін, цистеїн і триптофан схильні до окиснення, а мотиви аспарагін-гліцин до дезамідування. Тому чутливість різна для різних пептидів.
- pH і буфер. Стабільність розчиненого пептиду сильно залежить від pH, і навіть за однакового pH різні буфери дають різну швидкість руйнування.
- Цикли заморожування. Кристали льоду створюють поверхні розділу, на яких пептиди агрегують.
Як зберігати пептиди в сухому вигляді?
- Холод. Для звичайного зберігання від 2 до 8 °C, для тривалого мінус 20 °C і нижче. Головний орієнтир це умова, вказана в сертифікаті аналізу. Наприклад, для BPC-157 10 мг і GHK-Cu 100 мг специфікація PureChems вказує від 2 до 8 °C і захист від світла.
- Темрява. Тримайте флакони в зовнішній коробці або непрозорому контейнері.
- Ціла пробка. Не порушуйте запайку, поки матеріал не знадобиться: пробка і обтиск захищають від вологи і кисню.
- Нагрівання перед відкриттям. Дайте запаяному флакону досягти кімнатної температури. Якщо відкрити холодний флакон, вологе повітря сконденсується на порошку і принесе саме ту воду, від якої захищає сухе зберігання.
Як зберігати розчин пептиду?
Розчин набагато менш стабільний, ніж сухий порошок, тому його розглядають як короткочасний робочий запас. Зберігайте його в холодильнику, захищеним від світла, і розводьте лише ту кількість, яка потрібна.
- Діліть розчин на аліквоти замість того, щоб багато разів відкривати один флакон.
- Записуйте чотири речі: розчинник, концентрацію, дату розведення і температуру зберігання. Без них пізніший результат аналізу неможливо інтерпретувати.
- Пам'ятайте, що розчинник впливає на стабільність, бо різні розчинники мають різний pH і вміст консерванту.
Для флаконів, з яких розчин набирають кілька разів, часто обирають бактеріостатичну воду з консервантом. Порівняння розчинників є в статті Бактеріостатична вода чи оцтова кислота, а розрахунок концентрації в статті Як розрахувати концентрацію пептиду.
Чи можна заморожувати розчин пептиду?
Повторне заморожування і розморожування це стандартна стресова умова в дослідженнях стабільності: лід утворює поверхні, на яких пептиди агрегують, а розчинені речовини концентруються в рідині, що залишилась. Тому, якщо розчин заморожують, то лише невеликими аліквотами, кожну з яких розморожують один раз.
Зверніть увагу на тип морозильної камери. Камера з автоматичним розморожуванням (no frost) навмисно змінює температуру за циклом, тож для тривалого зберігання вона гірша за камеру з ручним розморожуванням.
Як зберігати розчинники і капсули?
Розчинники мають інші вимоги. Бактеріостатичну воду і оцтову кислоту 0,6% за специфікацією зберігають при кімнатній температурі, від 15 до 25 °C, захищеними від забруднення.
Капсули зберігають за умовами конкретного продукту. Наприклад, капсули BPC-157 за специфікацією рекомендовано тримати від 2 до 8 °C, захищеними від світла і вологи, тоді як деякі інші капсульні продукти зберігають у сухому місці від 15 до 25 °C. Завжди дивіться на специфікацію і щільно закривайте флакон.
| Форма | Де зберігати | На що зважати |
|---|
| Ліофілізований пептид, звичайне зберігання | Від 2 до 8 °C | Темрява, ціла пробка |
| Ліофілізований пептид, тривале зберігання | Мінус 20 °C і нижче | Нагріти до кімнатної температури перед відкриттям |
| Розчин пептиду | Холодильник | Аліквоти, запис розчинника, концентрації і дати |
| Бактеріостатична вода, оцтова кислота | Від 15 до 25 °C | Захист від забруднення |
| Капсули | За специфікацією продукту | Захист від вологи, щільно закритий флакон |
Як зрозуміти, що з пептидом щось не так?
Ліофілізований пептид зазвичай має вигляд білого або майже білого пухкого «коржика» чи порошку (виняток, наприклад, GHK-Cu, який через мідь синій). Тривожні сигнали: зміна кольору, грудки, осілий або «розплавлений» коржик, каламутний розчин після розведення. Будь-що з цього варто перевірити, перш ніж продовжувати роботу. Як читати дані про чистоту, пояснюємо в статті Сертифікат аналізу пептиду: як читати COA і HPLC.
Що записувати під час зберігання?
- стан упаковки під час отримання;
- номер партії разом із сертифікатом аналізу, щоб чистоту завжди можна було зіставити з історією зберігання;
- випадки, коли морозильна камера вимикалася або нагрівалась.
Що ви отримуєте в PureChems
Кожна партія має чистоту від 99%, яку незалежна лабораторія підтверджує методами HPLC і мас-спектрометрії, і сертифікат аналізу. Відправляємо з країни ЄС у непомітній упаковці, з номером для відстеження. Оплатити можна карткою, через Google Pay або криптовалютою.
Часті запитання
Скільки зберігається ліофілізований пептид?
Універсальної відповіді немає: усе залежить від послідовності, формуляції і умов. Орієнтир для конкретної партії це умови зберігання і дата в її сертифікаті аналізу.
Чому пептид у розчині зберігається гірше?
Тому що вода бере участь у гідролізі та дезамідуванні, а розчинені молекули ще й злипаються та осідають на стінках.
Чи шкодить пептидам повторне заморожування?
Так. Кристали льоду сприяють агрегації, тому розчин ділять на аліквоти і розморожують кожну лише раз.
Чи потрібно тримати бактеріостатичну воду в холодильнику?
За специфікацією PureChems її зберігають при кімнатній температурі, від 15 до 25 °C, захищеною від забруднення.
Чому флакон треба нагріти перед відкриттям?
Щоб волога з повітря не сконденсувалася на холодному порошку. Вода в порошку прискорює його руйнування.
Лише для наукових досліджень. Не для споживання людиною чи твариною.