Калкулатор за пептиди: как се изчислява концентрацията след разтваряне

Накратко: Калкулатор за пептиди изчислява концентрацията на разтвора, след като лиофилизиран пептид се разтвори в точно измерен обем разтворител. Формулата е една: концентрация = маса на пептида ÷ обем на разтворителя. Ако 10 мг пептид се разтворят в 2 мл, концентрацията е 5 мг/мл, тоест 5 мкг във всеки микролитър.

Търсенето „калкулатор за пептиди“ обикновено идва от един и същ момент в лабораторията: флаконът с прах е на масата, разтворителят е готов и трябва да се знае колко пептид ще има във всеки отмерен обем. Тук е показано как се прави изчислението на ръка, с примери за флакони от 10 мг, как се преминава между милиграми, микрограми и молове и какви грешки се допускат най-често. Става дума само за лабораторни изчисления на концентрация и разреждане.

Калкулатор за пептиди: как работи формулата?

Всеки калкулатор за пептиди, онлайн или на хартия, прави едно и също:

C = m ÷ V

• C е концентрацията, например в мг/мл;
• m е масата на пептида във флакона, например 10 мг;
• V е обемът добавен разтворител, например 2 мл.

Двете полезни преобразувания са: 1 мг = 1000 мкг и 1 мл = 1000 мкл. От тях следва удобно правило: концентрация в мг/мл е равна на същото число в мкг/мкл. Разтвор от 5 мг/мл съдържа 5 мкг във всеки микролитър.

Колко разтворител за флакон от 10 мг?

Обемът се избира според това каква концентрация е удобна за опита. По-малко разтворител дава по-концентриран разтвор, по-голям обем дава по-разреден. Таблицата показва флакон с 10 мг пептид:

Добавен разтворител	Концентрация	В 100 мкл разтвор
1 мл	10 мг/мл (10 мкг/мкл)	1000 мкг
2 мл	5 мг/мл (5 мкг/мкл)	500 мкг
2,5 мл	4 мг/мл (4 мкг/мкл)	400 мкг
4 мл	2,5 мг/мл (2,5 мкг/мкл)	250 мкг
5 мл	2 мг/мл (2 мкг/мкл)	200 мкг

Същата сметка важи за всеки пептид от 10 мг, например BPC-157, Ipamorelin или Retatrutide. Различава се само молекулната маса, която има значение при моларните изчисления по-долу.

Как се изчислява обемът за определено количество пептид?

Често въпросът е обратен: в опита трябва определено количество пептид и трябва да се знае колко микролитра да се отмерят. Формулата се обръща:

V = нужно количество ÷ C

Пример: разтворът е 5 мг/мл, тоест 5 мкг/мкл. За 250 мкг пептид се отмерват 250 ÷ 5 = 50 мкл. При разтвор от 2 мг/мл за същото количество трябват 125 мкл.

Практичното правило е концентрацията да се избере така, че нужните обеми да са удобни за пипетата в лабораторията. Много малки обеми, от няколко микролитра, носят по-голяма относителна грешка.

Как се разрежда вече приготвен разтвор?

За работни разтвори от основния (стоков) разтвор се използва формулата за разреждане:

C1 × V1 = C2 × V2

C1 и V1 са концентрацията и обемът на стоковия разтвор, C2 и V2 са желаните концентрация и краен обем. Пример: от стоков разтвор 5 мг/мл трябва да се получи 1 мл с концентрация 0,5 мг/мл. V1 = 0,5 × 1 ÷ 5 = 0,1 мл. Отмерват се 100 мкл стоков разтвор и се допълват с 900 мкл разтворител.

Как се преминава към моларна концентрация?

В много протоколи концентрацията се задава в милимола на литър (mM) или микромола (µM), а не в мг/мл. Тогава е нужна молекулната маса от продуктовата страница или от сертификата:

c (mM) = C (мг/мл) ÷ M (г/мол) × 1000

• BPC-157 с молекулна маса около 1419,5 г/мол при 5 мг/мл дава около 3,52 mM.
• Ipamorelin с молекулна маса около 711,85 г/мол при 5 мг/мл дава около 7,02 mM.
• При Retatrutide продуктовата страница посочва приблизителна маса от 4,5 до 5,0 kDa, затова и моларното изчисление е приблизително.

Вижда се защо две вещества с еднаква концентрация в мг/мл може да имат много различен брой молекули в един и същ обем.

Пример стъпка по стъпка: от флакона до работния разтвор

1. Във флакона има 10 мг лиофилизиран пептид. Флаконът се оставя да достигне стайна температура.
2. Добавят се точно 2 мл разтворител, бавно по стената на флакона. Концентрацията е 10 ÷ 2 = 5 мг/мл.
3. За опита е нужен работен разтвор от 0,25 мг/мл с обем 2 мл. По формулата V1 = 0,25 × 2 ÷ 5 = 0,1 мл.
4. Отмерват се 100 мкл стоков разтвор и се допълват с 1900 мкл разтворител.
5. Двата флакона се надписват: съединение, концентрация, разтворител, дата.

Записването на всяка стъпка позволява по-късно да се провери откъде идва неочакван резултат.

Кой разтворител да се използва при изчислението?

За самата сметка разтворителят няма значение, важи само обемът. За разтварянето обаче има. Най-често се използва бактериостатична вода, а при трудно разтворими пептиди оцетна киселина 0,6 %, ако документацията го препоръчва. Разликите са описани в статията Бактериостатична вода или оцетна киселина.

Кои са най-честите грешки при изчисленията?

• Обем на око. Концентрацията е толкова точна, колкото е точен обемът. Разтворителят се отмерва с подходяща пипета или градуирана спринцовка за лабораторна работа.
• Объркване на мг и мкг. Разлика от хиляда пъти. Единиците се записват при всяка стъпка.
• Номинална маса вместо пептидно съдържание. Лиофилизираният прах съдържа и вода, соли и противойони. Ако сертификатът посочва пептидното съдържание, номиналната маса се умножава по него, за да се получи реалното количество пептид. Повече за това има в Сертификат за анализ (COA).
• Загуба при прехвърляне. Малка част от разтвора остава по стените на флакона и в накрайника. При малки обеми това се отразява на резултата.
• Липсващ етикет. Всеки флакон се надписва със съединението, концентрацията, разтворителя и датата на разтваряне.

Как се пази разтворът след изчислението?

Разтвореният пептид е по-малко стабилен от сухия прах. Затова се държи в хладилник, защитен от светлина, а при нужда се разделя на аликвоти, за да не се замразява и размразява многократно. Продуктовите страници на BPC-157, Ipamorelin и Retatrutide посочват съхранение на лиофилизирания прах при 2 до 8 °C, защитен от светлина. Подробно за условията четете в Как се съхраняват пептидите.

И трите пептида са налични в PureChems като лиофилизиран прах от 10 мг, с чистота ≥99 %, потвърдена с HPLC и масспектрометрия от независима лаборатория, и със сертификат за анализ за всяка партида.

Често задавани въпроси

Как се изчислява концентрацията на пептид след разтваряне?

Масата на пептида се разделя на обема на разтворителя. 10 мг в 2 мл дават 5 мг/мл, което е същото като 5 мкг/мкл.

Колко бактериостатична вода се добавя към 10 мг пептид?

Няма един правилен обем. Изборът зависи от концентрацията, удобна за опита: 1 мл дава 10 мг/мл, 2 мл дават 5 мг/мл, 5 мл дават 2 мг/мл. Важно е обемът да е отмерен точно и записан.

Влияе ли видът разтворител на изчислението?

Не. В сметката влиза само обемът. Видът разтворител влияе на разтворимостта и стабилността, не на математиката.

Защо реалното количество пептид може да е по-малко от посоченото?

Защото прахът съдържа и вода, соли и противойони. Хроматографската чистота не е същото като пептидното съдържание.

Как се превръщат мг/мл в mM?

Концентрацията в мг/мл се дели на молекулната маса в г/мол и се умножава по 1000.

Само за изследователски цели. Не е за консумация от хора или животни.