Ukratko: Čistoća peptida na certifikatu analize (COA) najčešće je rezultat HPLC-a i znači koliki udio površine svih detektiranih pikova pripada ciljnom peptidu. To nije isto što i udio peptida u masi praha, jer HPLC ne vidi vodu, soli i protuione. Identitet se potvrđuje masenom spektrometrijom, usporedbom izmjerene i teorijske mase.
Certifikat analize jedan je od najvažnijih i ujedno najčešće pogrešno čitanih dokumenata u radu s istraživačkim peptidima. Broj "99 %" ima vrlo različitu težinu ovisno o metodi kojom je dobiven, kako je metoda provedena i što čini preostali postotak. U ovom vodiču objašnjavamo što piše na COA, što mjere metode iza tih brojeva i kako procijeniti je li dokument stvarni dokaz.
COA je sažeto izvješće izdano za određenu proizvodnu seriju. Bilježi koja su ispitivanja provedena na toj seriji, koji su rezultati dobiveni i s kojom su specifikacijom uspoređeni. Budući da je vezan uz seriju, COA ima smisla samo ako broj serije na dokumentu odgovara broju na bočici koju držite u ruci.
Potpun COA za sintetski peptid obično sadrži:
HPLC (tekućinska kromatografija visoke djelotvornosti) razdvaja tvari u uzorku i bilježi ih kao pikove na kromatogramu. Čistoća se iskazuje kao postotak površine: koliki dio ukupne površine svih pikova otpada na pik ciljnog peptida.
Mjeri se pri navedenoj valnoj duljini, najčešće 214 nm (peptidna veza) ili 220 nm. Valna duljina je važna jer nečistoće koje pri toj valnoj duljini slabo apsorbiraju ostaju podzastupljene u izračunu. Zato COA treba navoditi valnu duljinu uz rezultat.
Tipične nečistoće povezane s peptidom su:
Masena spektrometrija (MS) utvrđuje identitet: uspoređuje izmjerenu masu molekule s teorijskom masom za navedenu sekvencu, uključujući sve izmjene. Potvrđuje da je u bočici prava molekula, ali sama po sebi ne kvantificira koliko je u uzorku nečeg drugog.
Primjeri teorijskih masa iz specifikacija naših proizvoda:
| Peptid | Molekulska formula | Teorijska masa |
|---|---|---|
| BPC-157 | C62H98N16O22 | 1419,535 g/mol |
| Ipamorelin | C38H49N9O5 | 711,85 g/mol |
| GHK-Cu | C14H24CuN6O4 | 340,9 g/mol |
Kod GHK-Cu posebno je važno da rezultat odgovara kompleksu s bakrom, jer je vezanje bakra temeljna kemijska osobina tog tripeptida.
Ovo je točka koja stvara najviše zabune. Kromatografska čistoća govori koliki dio detektiranog materijala srodnog peptidu čini ciljni peptid. Udio peptida govori koliki dio ukupne suhe mase u bočici uopće jest peptid.
Liofilizirani sintetski peptid rijetko je čisti peptid po masi. Prah sadrži i vodu upijenu tijekom rukovanja, ostatne soli i protuione iz pročišćavanja. Trifluoroctena kiselina (TFA) standardni je dodatak u preparativnom pročišćavanju i ostaje vezana uz bazične ostatke u gotovom prahu. Ovisno o sekvenci, voda, soli i protuioni mogu činiti znatan dio ukupne mase.
Peptid zato može imati točno iskazanu kromatografsku čistoću od 98 %, a da sam peptid čini osjetno manji dio onoga što pokazuje vaga. Oba broja su legitimna, samo odgovaraju na različita pitanja.
Zato dobar COA uz čistoću navodi i dodatne podatke. Protuion je najčešće trifluoroacetat iz pročišćavanja, ponekad zamijenjen acetatom, i iskazuje se odvojeno od čistoće. Udio vode određuje se Karl Fischerovom titracijom ili gubitkom sušenjem. Liofilizirani prah je higroskopan, pa se taj broj mijenja ovisno o tome kako je materijal čuvan i koliko je puta otvaran.
Objavljeni radovi o karakterizaciji peptida dosljedno pokazuju da jedna metoda rijetko istodobno dokazuje i identitet i čistoću. Zato se koriste ortogonalne metode: HPLC za čistoću i masena spektrometrija za identitet, a u zahtjevnijim slučajevima i kapilarna elektroforeza ili NMR. Jedan postotak na COA sažima vrlo složenu analitičku sliku u jedan broj.
Izgled je kvalitativan, ali koristan pokazatelj. Promjena boje ili grudice u prahu koji bi trebao biti rastresit bijeli liofilizat razlog su za provjeru prije bilo kakvog rada.
Svaki proizvod u našoj ponudi neovisni laboratorij provjerava HPLC-om i masenom spektrometrijom na čistoću od najmanje 99 %, a certifikat analize postoji za svaku seriju. Na stranici svakog proizvoda navedeni su oblik, sadržaj bočice, uvjeti čuvanja, molekulska formula i broj testa, primjerice BPC-2501-A za BPC-157 ili GHK-2501-A za GHK-Cu.
Šaljemo iz EU-a, diskretno i s praćenjem pošiljke, a plaćate karticom, Google Payem ili kriptovalutama. Kako uvjeti čuvanja utječu na čistoću s vremenom, pročitajte u vodiču čuvanje liofiliziranih peptida, a pripremu otopine u članku kako rekonstituirati peptide.
COA dokumentira analitička svojstva serije reagensa. Nije odobrenje za stavljanje u promet, nije dokaz sigurnosti i ne govori ništa o prikladnosti za primjenu na živom organizmu. Materijal može imati potpuno točan COA s visokom čistoćom i ispravnom masom, a i dalje biti isključivo laboratorijski reagens. Čistoća i sigurnost dva su različita pojma.
Da je u HPLC kromatogramu pik ciljnog peptida činio 99 % ukupne površine pikova pri navedenoj valnoj duljini. To ne znači da je 99 % mase u bočici peptid.
HPLC čistoća je udio ciljne sekvence među detektiranim tvarima srodnim peptidu. Udio peptida je dio ukupne suhe mase koji je peptid, a ostatak čine voda, soli i protuioni.
COA bez broja serije ne može se povezati s vašim materijalom. Bez kromatograma i masenog spektra nema neovisne procjene. Takav dokument je tvrdnja, a ne provjerljiv dokaz.
Metoda koja potvrđuje identitet usporedbom izmjerene i teorijske mase molekule.
Samo za istraživačku uporabu. Nije za ljudsku ni životinjsku konzumaciju.
Rekonstitucija je otapanje liofiliziranog peptida u odmjerenom volumenu otapala kako bi se dobila otopina poznate koncentracije. Vodič objašnjava postupak korak po korak i kada odabrati bakteriostatsku vodu, a kada octenu kiselinu 0,6 %.
Pročitaj članak
ARA-290 (cibinetid) je sintetski peptid izveden iz eritropoetina koji se istražuje zbog receptora urođenog popravka. Članak ga uspoređuje s B7-33, jednolančanim analogom relaksina, i Peptide-5, mimetikom koneksina 43.
Pročitaj članak
Senolitici su spojevi za koje se u pretkliničkoj literaturi izvještava da selektivno pokreću apoptozu senescentnih stanica. FOXO4-DRI je retro-inverzni peptid koji ometa interakciju FOXO4 i p53 i jedan je od najpoznatijih istraživačkih alata u tom području.
Pročitaj članak