Ukratko: Kako rekonstituirati peptide? U bočicu s liofiliziranim prahom polako, niz stijenku, dodajte točno odmjeren volumen otapala, a zatim bočicu lagano vrtite dok se prah ne otopi. Za većinu peptida topljivih u vodi koristi se bakteriostatska voda, a za peptide koji se teško otapaju razrijeđena octena kiselina, primjerice 0,6 %. Odlučujuća je preporuka iz dokumentacije za konkretni peptid.
Ako se pitate kako rekonstituirati peptide a da ne izgubite dio materijala ili ne narušite njegovu stabilnost, ovaj je vodič za vas. Objašnjavamo što rekonstitucija jest, kako izračunati koncentraciju, kako odabrati otapalo i koje pogreške u laboratoriju najčešće kvare rezultate. Riječ je isključivo o pripremi otopine za laboratorijski rad, ne o pripremi za primjenu.
Rekonstitucija je postupak u kojem se liofiliziranom (sušenjem smrzavanjem dobivenom) prahu doda odmjeren volumen otapala kako bi se dobila otopina poznate koncentracije. Prah je često tek tanak, gotovo nevidljiv sloj na dnu staklene bočice.
U tom koraku važne su dvije stvari: topljivost (hoće li se spoj potpuno otopiti) i stabilnost (hoće li u otopini ostati neoštećen). Peptidi se razlikuju po oba svojstva, i upravo zato u laboratoriju postoji više od jednog otapala.
Konačna koncentracija ovisi o poznatoj masi praha i volumenu dodanog otapala: koncentracija = masa peptida / volumen otapala. Primjer računa: 10 mg peptida otopljeno u 2 ml otapala daje otopinu od 5 mg/ml. Ako dodate 5 ml, dobit ćete 2 mg/ml. Zato je važno da je masa u bočici jasno navedena i potvrđena dokumentacijom.
Bakteriostatska voda je sterilna voda kojoj je kao konzervans dodano 0,9 % benzilnog alkohola. Konzervans koči rast bakterija kad se ista bočica otvara više puta. Obična sterilna voda takvu zaštitu nema.
U laboratoriju je bakteriostatska voda zadani izbor jer:
Najbolje odgovara peptidima koji su već dobro topljivi u vodi. Isporučujemo je u staklenoj bočici od 10 ml, a čuva se na sobnoj temperaturi (od 15 do 25 °C), zaštićena od onečišćenja.
Octena kiselina 0,6 % daje blago kiselo okruženje. Neki peptidi, osobito ljepljivi, skloni nakupljanju (agregaciji) ili slabo topljivi pri neutralnom pH, u blago kiselim uvjetima otapaju se lakše. Kod takvih sekvenci kiselo okruženje može biti razlika između bistre otopine i mutne, nepotpuno otopljene.
Octena kiselina zato se koristi kao pomoć pri otapanju, a ne kao zadano otapalo. Obično se kombinira s planom razrjeđivanja ili prilagodbe nakon što je spoj otopljen. S kiselinama radite uz uobičajene laboratorijske mjere opreza. Isporučujemo je u staklenoj bočici od 10 ml, a čuva se na sobnoj temperaturi.
Istraživanja formulacija godinama pokazuju da pH i sastav pufera snažno utječu i na topljivost i na stabilnost peptida. U jednoj usporednoj studiji modelni peptid bio je najstabilniji u blago kiselom rasponu, oko pH 3 do 4. Pregledni radovi kao česte uzroke razgradnje navode temperaturu, mehaničko miješanje i dugo čuvanje u otopini.
| Bakteriostatska voda | Octena kiselina 0,6 % | |
|---|---|---|
| Sastav | sterilna voda i 0,9 % benzilnog alkohola | razrijeđena octena kiselina |
| pH | blizu neutralnog | blago kiseo |
| Uloga | opće, zadano otapalo | pomoć pri otapanju teško topljivih sekvenci |
| Višekratno uzimanje | da, konzervans koči rast bakterija | prema planu pokusa |
| Čuvanje | od 15 do 25 °C | od 15 do 25 °C |
BPC-157 je sintetski peptid od 15 aminokiselina koji isporučujemo kao liofilizirani prah, 10 mg u staklenoj bočici od 10 ml. Kao i za ostale peptide, otapalo odaberite prema dokumentaciji serije, otopinu pripremite postupkom opisanim gore i čuvajte je na 2 do 8 °C, zaštićenu od svjetla. Nakon otapanja rok trajanja kraći je nego kod suhog praha, pa mnogi laboratoriji otapaju manje količine i češće.
Što se s otopinom događa nakon pripreme, opisujemo u vodiču kako čuvati liofilizirane peptide. Kako provjeriti čistoću i identitet prije otapanja, pročitajte u članku COA certifikat analize. Više o samom otapalu naći ćete u članku bakteriostatska voda gdje kupiti.
Otapala i peptide šaljemo iz EU-a, diskretno i s praćenjem, a plaćate karticom, Google Payem ili kriptovalutama. Za svaku seriju postoji COA, a čistoću od najmanje 99 % neovisni laboratorij potvrđuje HPLC-om i masenom spektrometrijom.
Ovisi o peptidu. Peptidi dobro topljivi u vodi obično se otapaju u bakteriostatskoj vodi, a ljepljive ili slabo topljive sekvence potpunije se otapaju u razrijeđenoj octenoj kiselini.
Razrijeđena octena kiselina daje blago kiselo okruženje koje mnogi peptidi dobro podnose. Kompatibilnost ipak ovisi o sekvenci, pa je istraživači provjeravaju za svoj materijal.
Benzilni alkohol koči rast bakterija i smanjuje rizik od onečišćenja pri višekratnom uzimanju.
Ne. Bočicu lagano vrtite i pustite da se prah otopi sam.
Samo za istraživačku uporabu. Nije za ljudsku ni životinjsku konzumaciju.
ARA-290 (cibinetid) je sintetski peptid izveden iz eritropoetina koji se istražuje zbog receptora urođenog popravka. Članak ga uspoređuje s B7-33, jednolančanim analogom relaksina, i Peptide-5, mimetikom koneksina 43.
Pročitaj članak
Senolitici su spojevi za koje se u pretkliničkoj literaturi izvještava da selektivno pokreću apoptozu senescentnih stanica. FOXO4-DRI je retro-inverzni peptid koji ometa interakciju FOXO4 i p53 i jedan je od najpoznatijih istraživačkih alata u tom području.
Pročitaj članak
Timozin alfa 1 je acetilirani peptid od 28 aminokiselina izoliran iz timusa i najbolje dokumentirani član skupine timusnih peptida. Članak ga uspoređuje s Thymulinom, peptidom ovisnim o cinku, i tripeptidom KPV iz alfa-MSH.
Pročitaj članak