HPLC och masspektrometri är de två metoder som oftast används för att kontrollera renheten och identiteten hos peptider. Kort svar: HPLC visar hur stor del av det som syns i analysen som är just målpeptiden, medan masspektrometri bekräftar att molekylen har rätt massa och alltså är rätt substans. Tillsammans ger de en bild av en peptids renhet som ingen av metoderna ger på egen hand.
Endast för forskningsändamål. Ej avsedd att förtäras av människor eller djur.
Den här guiden går igenom vad som står på ett analyscertifikat, vad siffrorna faktiskt mäter och vilka frågor du ska ställa innan du litar på dokumentet.
En syntetisk peptid byggs upp en aminosyra i taget. Varje steg kopplar på nästa aminosyra i kedjan, och inget steg fungerar till hundra procent. En liten andel av kedjorna missar därför en aminosyra eller slutar för tidigt. Ju längre peptiden är, desto fler steg och desto fler möjliga biprodukter.
Efter syntesen renas peptiden, oftast med preparativ HPLC. I reningen används trifluorättiksyra, och rester av den följer med som motjon i det färdiga pulvret. Till sist frystorkas lösningen till ett pulver. Varje steg lämnar spår, och det är dem analysen ska fånga.
HPLC står för high performance liquid chromatography, på svenska högupplösande vätskekromatografi. För peptider används oftast omvänd fas, reversed phase. Provet pressas genom en kolonn, och olika molekyler kommer ut vid olika tidpunkter beroende på hur de samverkar med kolonnens material.
En detektor mäter hur mycket ljus som absorberas när ämnena passerar. Resultatet blir ett kromatogram: en kurva med toppar, där varje topp motsvarar ett ämne. Målpeptiden ska ge en stor, tydlig topp och eventuella föroreningar små toppar runt omkring.
När ett analyscertifikat anger 99 % renhet betyder det oftast att målpeptidens topp utgör 99 % av den totala toppytan i kromatogrammet vid den angivna våglängden. Det är ett relativt mått på de peptidrelaterade ämnen som metoden ser.
Våglängden spelar roll. För peptider används oftast 214 eller 220 nm, där peptidbindningen absorberar ljus. Föroreningar som inte absorberar starkt vid den våglängden syns sämre och blir underrepresenterade i siffran.
Typiska föroreningar i en syntetisk peptid är:
Masspektrometri, förkortat MS, mäter molekylens massa. Den uppmätta massan jämförs med den teoretiska massan för sekvensen, inklusive eventuella modifieringar. Stämmer de överens vet du att rätt molekyl finns i flaskan.
MS säger däremot inte hur mycket av något annat som finns där. Därför kombineras metoderna: masspektrometri bekräftar identiteten och HPLC mäter renheten. Publicerad forskning om hur peptider karakteriseras visar samma sak gång på gång, nämligen att en enda metod sällan räcker för både identitet och renhet. Vid mer krävande analyser används ytterligare metoder, till exempel kapillärelektrofores eller NMR, som oberoende kontroller.
Det här är det som oftast missförstås på ett analyscertifikat.
Ett frystorkat pulver är sällan bara peptid. Det innehåller också vatten som tagits upp under hanteringen, salter och motjoner från reningen, oftast trifluoracetat. En peptid kan alltså ha 99 % renhet enligt HPLC samtidigt som själva peptiden utgör en mindre andel av det som vågen visar. Båda siffrorna är korrekta. De svarar bara på olika frågor.
Ett analyscertifikat, COA, gäller alltid en specifik batch. Ställ de här frågorna:
Ett certifikat utan batchnummer går inte att koppla till materialet du har framför dig. Ett certifikat med bara en tabell gör det omöjligt att själv bedöma toppens form och baslinjen. Mer om själva dokumentet finns i Vad är ett analyscertifikat (COA)?.
Varje batch testas av ett oberoende tredjepartslabb med HPLC och masspektrometri, till minst 99 % renhet, och analyscertifikatet finns för varje batch. Det gäller till exempel TB-500, MOTS-c och Semax, som alla levereras som frystorkat pulver i förseglade glasflaskor.
Peptiderna framställs i kontrollerad renrumsmiljö, förseglas och skickas spårbart och diskret inom EU. Du betalar med kort, Google Pay eller krypto.
Tänk på att ett analyscertifikat beskriver batchens analytiska egenskaper. Det är inget godkännande och säger ingenting om lämplighet för användning på människor eller djur. Renhet och säkerhet är två helt olika saker.
Ett certifikat beskriver batchen vid analystillfället. Värme, fukt, ljus och upprepad frysning och upptining kan bryta ned en peptid efteråt. Frystorkat pulver tål betydligt mer än en upplöst lösning, eftersom vatten deltar i de flesta nedbrytningsreaktioner.
Låt en kall flaska nå rumstemperatur innan du öppnar den, så att fukt inte kondenserar på pulvret. Spara analyscertifikatet tillsammans med batchnumret och datum för mottagning och upplösning. Läs mer i Förvara peptider rätt och om val av lösningsmedel i Bakteriostatiskt vatten eller ättiksyra.
High performance liquid chromatography, högupplösande vätskekromatografi. Metoden separerar ämnena i ett prov så att renheten kan mätas.
Nej. HPLC mäter renhet. För att bekräfta att det är rätt molekyl behövs masspektrometri, som jämför uppmätt och teoretisk massa.
Nej. Renheten anger andelen målpeptid bland de peptidrelaterade ämnen som HPLC ser. Vatten, salter och motjoner syns inte i den siffran.
Det behöver inte betyda att något är fel, men utan kromatogram och masspektrum blir dokumentet ett påstående snarare än något du kan kontrollera själv.
Nej. Det dokumenterar renhet och identitet för en batch, inget annat.
Endast för forskningsändamål. Ej avsedd att förtäras av människor eller djur.
AOD-9604 och HGH Fragment 176-191 bygger båda på tillväxthormonets C-terminala del och studeras i forskning om fettmetabolism. Artikeln reder ut skillnaden, var tesamorelin passar in och vad du ska kontrollera innan du köper.
Läs artikeln
MK-677 (ibutamoren) är en liten icke-peptidmolekyl som studeras som agonist till ghrelinreceptorn och frisättare av tillväxthormon. Här får du veta vad den är, varför den säljs i kapslar, hur den skiljer sig från ipamorelin och GHRP-6 och vad du ska kontrollera innan du köper.
Läs artikeln
Att rekonstituera peptider betyder att lösa frystorkat pulver i ett lösningsmedel till en känd koncentration. Guiden visar hur du väljer mellan bakteriostatiskt vatten och ättiksyra, räknar ut volymen och gör det steg för steg.
Läs artikeln