In breve: il certificato di analisi dei peptidi (COA, dall'inglese Certificate of Analysis) è il referto che riassume i test eseguiti su un singolo lotto di produzione. Per leggerlo bene bastano tre controlli: il numero di lotto deve coincidere con quello della fiala, la purezza deve indicare il metodo (di solito HPLC) e l'identità deve essere confermata dalla spettrometria di massa, con la massa misurata vicina a quella teorica.
Chi lavora con peptidi da ricerca riceve spesso un COA insieme al materiale, ma non sempre sa interpretarlo. Un "99%" stampato in grande può voler dire cose diverse a seconda di come è stato ottenuto. Vediamo voce per voce cosa c'è scritto e cosa no.
Il certificato di analisi è un documento che riporta, per uno specifico lotto, quali analisi sono state fatte, quali risultati sono usciti e con quale specifica sono stati confrontati. È legato al lotto, non al prodotto in generale. Per questo ha valore solo se il numero di lotto sul foglio corrisponde a quello sull'etichetta della fiala che si ha in mano.
Un COA generico, senza numero di lotto, oppure con un lotto che non corrisponde al materiale ricevuto, non garantisce alcuna tracciabilità. In pratica va trattato come materiale promozionale, non come prova analitica.
Un COA abbastanza completo per un peptide sintetico riporta di solito queste informazioni:
Prendiamo il BPC-157 da 10 mg. Il BPC-157 è un pentadecapeptide, cioè una catena di 15 amminoacidi, con formula C62H98N16O22 e peso molecolare di circa 1419,5 g/mol. Su un COA ben fatto si trova questo valore teorico accanto alla massa effettivamente misurata dallo spettrometro: se i due numeri sono coerenti, la molecola nella fiala è quella giusta.
Con il GHK-Cu il discorso cambia un po'. Si tratta di un tripeptide (glicina, istidina, lisina) legato a uno ione rame(II), con formula C14H24CuN6O4. Il rame fa parte della molecola, per questo nel certificato deve comparire nella formula e nella massa. Per un peptide molto più grande come il retatrutide, il peso molecolare si misura in kilodalton (circa 4,5-5 kDa) e lo spettro di massa ha un aspetto diverso, ma il principio resta lo stesso: confronto tra massa attesa e massa trovata.
No, ed è l'equivoco più diffuso. La purezza cromatografica indica quale frazione del materiale peptidico rilevato è il peptide target. Il contenuto peptidico indica quale frazione della massa secca totale nella fiala è effettivamente peptide.
Una polvere liofilizzata non è mai peptide al 100% in peso. Contiene acqua assorbita durante la manipolazione, sali residui e controioni rimasti dalla purificazione. L'acido trifluoroacetico (TFA) è l'additivo standard nella purificazione in fase inversa e resta in parte associato ai residui basici. Un materiale può quindi avere una purezza HPLC del 98% e allo stesso tempo un contenuto peptidico sensibilmente più basso. Entrambi i numeri sono corretti, rispondono solo a domande diverse. Un COA che riporta solo la purezza racconta metà della storia.
Sono due tecniche complementari e nessuna delle due, da sola, basta a stabilire sia identità sia purezza.
Le impurezze tipiche dei peptidi sintetici sono sequenze con un amminoacido mancante, sequenze troncate, specie non del tutto deprotette, metionina o cisteina ossidate, asparagina o glutammina deammidate. Il controione (TFA, a volte scambiato con acetato) e l'acqua, misurata con titolazione Karl Fischer o perdita all'essiccamento, vanno riportati a parte. Per approfondire i due metodi c'è la guida su purezza dei peptidi, HPLC e spettrometria di massa.
Anche l'aspetto fisico dice qualcosa. Una polvere che dovrebbe essere una pastiglia bianca e friabile e invece appare scolorita o impaccata merita una verifica prima di qualunque analisi.
Un COA documenta le proprietà analitiche di un lotto di reagente. Non è un'autorizzazione, non è una prova di sicurezza e non dice nulla sull'idoneità alla somministrazione a un essere vivente. Nell'Unione europea i peptidi da ricerca sono forniti come reagenti chimici nel quadro REACH, non come medicinali: non sono valutati né autorizzati dall'EMA o dalle autorità nazionali e non sono prodotti secondo le norme GMP farmaceutiche. Purezza e sicurezza sono concetti distinti.
Diversi composti venduti come reagenti di ricerca sono inoltre vietati nello sport dall'Agenzia mondiale antidoping (WADA). Il COA conferma cosa c'è nella fiala, non cambia lo stato regolatorio della sostanza.
Il certificato va archiviato insieme al numero di lotto, alla data di ricevimento e a quella di ricostituzione. Solo così un risultato anomalo, mesi dopo, può essere ricondotto al materiale. Anche la conservazione incide sui valori: la polvere liofilizzata è igroscopica e il contenuto d'acqua cambia con la manipolazione. Le regole pratiche sono nella guida su come conservare i peptidi liofilizzati.
Ogni lotto PureChems ha il proprio certificato di analisi. La purezza ≥99% è verificata da un laboratorio terzo con HPLC e spettrometria di massa. I peptidi arrivano liofilizzati in fiala sigillata, con spedizione tracciata e discreta dall'interno dell'UE; si paga con carta, Google Pay o criptovalute. Prima di ordinare, i criteri per scegliere un fornitore sono riassunti in comprare peptidi online in Europa.
Di norma significa che, nel cromatogramma HPLC, il picco del peptide target rappresenta il 99% dell'area totale integrata alla lunghezza d'onda indicata. È una misura relativa delle specie peptidiche rilevate, non della massa totale nella fiala.
La purezza HPLC è la quota di materiale peptidico rilevato che corrisponde alla sequenza giusta. Il contenuto peptidico è la quota della massa secca che è peptide; il resto sono acqua, sali e controioni. Un COA completo riporta entrambi.
Non è collegabile al materiale ricevuto, quindi non offre tracciabilità. Lo stesso vale, in misura minore, per un COA senza cromatogramma né spettro: non è per forza un problema, ma riduce il documento a una dichiarazione.
No. Il COA descrive solo le proprietà analitiche del lotto. Non è un'autorizzazione e non attesta la sicurezza.
A confermare l'identità: la massa misurata deve corrispondere a quella teorica della sequenza dichiarata.
Solo per uso di ricerca. Non destinato al consumo umano o animale.
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